产品货号：
BTN130845
中文名称：
柱式分枝杆菌RNA提取试剂盒
英文名称：
Mycobacteria RNA Column extraction kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是采用柱式吸附法提取分枝杆菌RNA的试剂盒
分枝杆菌属（Mycobacterium）是极为古老的细菌，与人类的疾病相关的就有25种以上，包括引起结核病的结核分枝杆菌（Mycobacteria tuberculosis）。近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现，分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法，但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的细胞壁，快速提取其基因组RNA一直是十分棘手的技术问题。
保存：-20℃，有效期1年。
注意：试验所用的实验室环境、耗材等均需要RNase-free。
一、培养的分枝杆菌样品的预处理
二、含分枝杆菌的痰液样品的预处理
三、分枝杆菌菌基因组DNA的提取
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分枝杆菌属（Mycobacterium）是极为古老的细菌，与人类的疾病相关的就有25种以上，包括引起结核病的结核分枝杆菌（Mycobacteria tuberculosis）。近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现，分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法，但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的细胞壁，快速提取其基因组RNA一直是十分棘手的技术问题。
- 操作简单，客户不需要准备额外的试剂。
- PCR检测灵敏度一般在10-100 CFU/mL样品。
- 既可以使用培养的细菌，也可以使用痰液、精液、血液、脑脊液等样品。
- 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。
- 安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。
| 组分 | 规格 |
| 柱式分枝杆菌RNA提取溶液A | 25mL |
| 柱式分枝杆菌RNA提取溶液B | 25mL |
| 化痰液成分(干粉) | 5g |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| RNA洗脱液 | 10mL |
保存：-20℃，有效期1年。
注意：试验所用的实验室环境、耗材等均需要RNase-free。
一、培养的分枝杆菌样品的预处理
- 刮取培养的分枝杆菌到0.5mL自备TE缓冲液中。
- 80℃放置20分钟以杀灭细菌。
- 3000g室温离心15分钟，弃上清。
- 将细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组RNA提取步骤。
二、含分枝杆菌的痰液样品的预处理
- 将痰液样品(0.5mL～2mL)加入到干净的10mL或15mL塑料离心管中。
- 加2mL的自备蒸馏水，在加入100mg化痰液干粉，充分混合均匀后室温放置15～30分钟。如果痰很浓，可以延长保温时间。
- 3000g室温离心15分钟，弃上清。
- 将细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组RNA提取步骤。
三、分枝杆菌菌基因组DNA的提取
- 向上述有分枝杆菌沉淀的离心管中加入0.3mL溶液A，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。此时裂解物总体积0.4mL。加入约0.2倍体积的自备氯仿(10.4mL裂解物需0.1mL氯仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。
- 12000～15000g室温离心3分钟。将上清液（约0.3mL）转移到离心吸附柱中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。
- 加入等体积（约0.3mL）的溶液B，充分混匀后全部上柱。
- 12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
- 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复此步一次。
- 室温12000～15000g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
- 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free收集管中，加入30～100μL RNA洗脱液，室温放置两分钟。
- 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
- RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子。
- RNA产量产率测定：将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1OD260的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。
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