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本制品是一款分枝杆菌RNA纯化试剂盒，采用柱式操作，更加简单快捷，整个过程只需要约30分钟。得到的RNA纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA合成等实验。

分枝杆菌属（Mycobacterium spp.）是极为古老的细菌，与人类的疾病相关的就有25种以上，包括引起结核病的结核分枝杆菌（Mycobacteria tuberculosis）。近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现，分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法，但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的细胞壁，快速提取其基因组RNA一直是十分棘手的技术问题。

• 培养的分枝杆菌样品
  
  • 刮取培养皿培养的分枝杆菌到0.5mL自备TE缓冲液中。
    
  • 80℃放置20分钟以杀灭分枝杆菌。
    
  • 3000×g室温离心15分钟，弃上清。
    
  • 将分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第二步的分枝杆菌基因组RNA提取步骤。
• 含分枝杆菌的痰液样品
  
  • 将痰液样品(0.5mL～2mL)加入到干净的10mL或15mL塑料离心管中。
    
  • 加2mL的自备蒸馏水。
    
  • 再加入100mg自备的化痰液干粉。
    
  • 充分混合均匀后室温放置15～30分钟。如果痰很浓，可以延长保温时间30分钟。
    
  • 3000×g室温离心15分钟，弃上清。
    
  • 将分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第二步的分枝杆菌基因组RNA提取步骤。

• 向上述装有分枝杆菌沉淀的离心管中加入0.4mL分枝杆菌RNA纯化溶液A并充分吹打混匀。如果分枝杆菌RNA纯化溶液A存放时产生沉淀，请置于65℃融化，用前充分摇晃均匀。
  
• 加入0.4mL分枝杆菌RNA纯化溶液B，剧烈振荡30秒。
  
• 65℃保温5分钟。
  
• 室温12000～15000×g离心3～5分钟。
  
• 转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
  
• 再加入0.1mL分枝杆菌RNA纯化溶液B和0.1mL自备氯仿，振荡混匀30秒。
  
• 室温12000～15000×g离心3～5分钟。
  
• 转移上清到一自备的、干净的5mL塑料离心管中。
  
• 加入相当于上清3倍体积的分枝杆菌RNA纯化溶液C（约1.2～1.5mL）和1倍体积的溶液D（约0.4～0.5mL），充分混匀。
  
• 将混合液（约2.5mL）分3～4次转移到离心吸附柱中。每次13000～15000×g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
  
• 用0.5mL通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
  
• 一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280比值不高，可以再用0.5mL通用洗柱液重复此步一次。
  
• 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的洗柱液会影响RNA的使用。
  
• 将离心吸附柱转移到一自备的1.5mL塑料离心管(RNase-free)中，加入30～100μL RNA洗脱液。
  
• 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

• RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳。
  
• RNA产量产率测定：将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/分枝杆菌用量)。注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%～15%。
  
• RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0～2.3之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用多糖清除剂去除。测OD时RNA不能过度稀释使OD读数低于仪器的有效范围，如果低于一起的检测范围，该读数无效。